SIRT3多酚激活剂的抗细胞氧化应激作用及机制
陈慧，彭雨欣，徐莹皓，赵冲*
（中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）
基金项目：国家自然科学基金青年科学基金项目（31901691）
作者简介：陈慧（1992—），女，博士生
通信作者：赵冲 E-mail: zhaoch0206@cau.edu.cn
1. 研究背景及目的
多酚是植物性食物中广泛存在的一种非营养成分，具有丰富的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗衰老、抗菌和光损伤?；ぷ饔玫?，在促进人体健康、美容护肤等方面发挥重要作用。日常膳食中的水果、蔬菜、全谷物、香草、香料、咖啡豆和茶叶等是多酚的主要来源，而这些食物中的多酚类化合物在经肠道吸收后是否对皮肤具有?；ぷ饔蒙杏写骄?。鉴于此，本研究利用体外模拟肠道吸收系统——Caco-2人结直肠腺癌细胞与HaCaT人角质细胞trans-well共培养体系，评价了白藜芦醇、山奈酚、安石榴苷、漆树黄酮以及月见草素B等多酚类化合物间接抗细胞氧化应激作用，并对其分子机制进行了初步探究。
2. 研究方法
采用细胞电阻仪测定单层Caco-2细胞的跨膜电阻值，以确定细胞具有足够紧密连接和完整性的培养时间。将接种有自发分化形成紧密连续的单层Caco-2细胞的小室，置于接种有HaCaT细胞的24孔板上，即形成Caco-2细胞与HaCaT细胞trans-well共培养体系，AP侧为Caco-2细胞，BL侧为HaCaT细胞。构建HaCaT细胞SIRT3-EGFP报告基因系统，探究5种多酚类化合物干预后HaCaT细胞SIRT3基因表达水平，并评价其对UVB诱导HaCaT细胞产生ROS的清除作用。构建shSIRT3-HaCaT细胞模型，探究月见草素B对细胞内ROS的清除作用是否具有SIRT3依赖性。
Caco-2与HaCaT细胞trans-well共培养体系
3. 结果
选择在Caco-2细胞培养14 d时，建立Caco-2和HaCaT细胞共培养体系。在5种多酚类化合物的干预下，HaCaT细胞内SIRT3-EGFP荧光强度相比于对照组（DMSO）均显著增强。此外，qRT-PCR结果显示，白藜芦醇、山奈酚、月见草素B显著上调了HaCaT细胞内源性SIRT3基因mRNA表达水平。
注：*. 与对照组相比较，P ＜ 0.05；**. 与对照组相比较，
P ＜ 0.01；***. 与对照组相比较，P ＜ 0.001。
多酚类化合物对外源性SIRT3-EGFP荧光强度的影响
注：**. 与对照组相比较，P ＜ 0.01；***. 与对照组相比较，P ＜ 0.001。
多酚类化合物对SIRT3 mRNA表达水平的影响
在Non-UVB条件下，白藜芦醇、山奈酚、月见草素B对细胞内ROS的产生没有显著影响；而在UVB照射条件下，月见草素B显著降低了UVB诱导的HaCaT细胞氧化应激。而在HaCaT细胞中敲低SIRT3基因后，月见草素B对ROS的抑制作用也显著降低，表明月见草素B对HaCaT细胞ROS的清除作用具有SIRT3依赖性。
注：***. 与UVB-对照组相比较，P＜0.001； ##. 与Non-UVB-对照组相比较，P＜0.01。
激活SIRT3的多酚类化合物对细胞内ROS含量的影响
注：***. 与Mock-对照组相比较，P＜0.001。
SIRT3基因沉默对月见草素B清除细胞内ROS的影响
4. 结论
本文研究发现月见草素B在Caco-2与HaCaT细胞共培养体系中，能够增强HaCaT细胞SIRT3基因的表达，并抑制UVB引起的HaCaT细胞氧化应激水平，其抗氧化作用具有SIRT3依赖性，这为月见草素B作为食品功能因子的开发提供了理论依据。今后可进一步探究月见草素B在Caco-2细胞单层模型中的摄取特性、转运机制以及代谢产物的组成，深入探究月见草素B依赖SIRT3发挥抗氧化作用的分子机制。
